Hongos presentes en los cultivos de rosas y aguacate Hass en Colombia

Study Extent

Se realizó un muestreo para colecta de frutos de aguacates de muestras comerciales en las localidades de San Vicente de Ferrer en Antioquia y Silvia en Cauca. Por otro lado, en cuanto al material vegetal de rosas las muestras comerciales fueron recolectadas en Cogua y Sopó en Cundinamarca. Las cuales posteriormente fueron transportadas y estudiadas en el Centro de Investigación Tibaitatá de AGROSAVIA.

Sampling

Flores de rosa variedad Freedom fueron recolectadas en invernadero en etapa de corte de una flora productora y exportadora de rosas en la Provincia de Sabana Centro en el municipio de Cogua, vereda el Mortiño (Cundinamarca). Las flores fueron dispuestas en cámara húmeda (21 °C; 7 días) y vida en florero (10 días) para observación del desarrollo de moho gris causada por Botrytis cinerea. Flores con síntomas de la enfermedad y con desarrollo de conidios fueron procesadas en condiciones de laboratorio. El aislamiento del fitopatógeno se realizó a partir de conidios sembrados en medio Agar Papa Dextrosa (PDA) siendo purificado y codificado como BC001. Flores de rosa variedad Pink Floyd con síntomas de moho gris se colectaron en área de postcosecha de una empresa exportadora de rosas, en Sabana Centro en Sopó (Cundinamarca) y transportadas al laboratorio. Flores individualizadas en bolsa de plástico con papel húmedo se almacenaron (4°C; 7 días). Muestras de pétalos fueron esterilizadas superficialmente (agua destilada estéril: 1 minuto, hipoclorito de sodio 1%: 1 minuto, etanol 70%: 1 minuto y tres lavados en agua destilada estéril). Tres fragmentos de pétalo se colocaron en placas de Petri con PDA (método directo). Además, un fragmento de pétalo vegetal se adhirió a la tapa de la placa de Petri usando vaselina, para permitir que los conidios formados cayeran en PDA y se incubaron (25°C; 4 días) (método indirecto). Aislamiento de B. cinerea en PDA se codificaron como UA001. Se realizó purificación mediante aislamiento de fragmentos hifales según Leyronas et al. (2012). La cepa se conservó utilizando crecimiento micelial sobre papel de filtro en placas de PDA, recolectadas en viales estériles y almacenadas (-80°C). Frutos de aguacate variedad Hass en punto de cosecha fueron recolectados en sitio de acopio de la Cooperativa Multiactiva Ecomun Esperanza del Pueblo (COOMEEP), en el municipio de Silvia (Cauca). Un kilo del material vegetal fue dispuesto en bolsas de polietileno de baja densidad, embalado en caja de cartón y enviado vía aérea para su procesamiento en laboratorio. Los frutos fueron lavados en hipoclorito de sodio al 1% y enjuagados con agua destilada estéril para eliminar contaminantes externos, secando con toallas de papel y dispuestos en cámaras húmedas (25°C, 14 días) para la observación de desarrollo de síntomas característicos propios de antracnosis causados por Colletotrichum sp.. A partir de lesiones hundidas generadas en la epidermis del fruto y con la formación de masas compactas de color salmon-naranja se tomó mediante raspado con asa recta estéril una muestra de esporas que fue sembrada en cajas Petri conteniendo PDA (25°C; 7 días) hasta obtener crecimiento del patógeno. Resiembras sucesivas en PDA se realizaron para purificar el fitopatógeno siendo codificado como CC001.

Method steps

1. Aislamiento de las cepas, metodología rosas: 1.Se recolectaron muestras en la sección de poscosecha de una empresa exportadora de rosas en Cogua y Sopó, Cundinamarca, Colombia. 2.Las rosas con síntomas se transportaron al laboratorio y se almacenaron a 4 °C. 3.Los pétalos de rosa se esterilizaron superficialmente. 4.Se cortaron tres fragmentos de material vegetal. 5.Los fragmentos se colocaron en placas de Petri con agar dextrosa papa (PDA). 6.Adicionalmente, se adhirió un fragmento a la tapa de la placa para permitir la caída de esporas (método indirecto). 7.Las placas con colonias similares a B. cinerea se aislaron en PDA. 8.Se realizó el método de aislamiento de fragmentos de hifas para purificar las cepas, aislamiento de B. cinerea en PDA se codificaron como UA001. 9.Las cepas se conservaron a -80 °C. 10.Para evaluar la capacidad de infección, se preparó una suspensión de conidios ajustada a 1x10^5 conidios/mL. 11.Se inocularon diez tallos de rosa con esta suspensión y otros diez con agua destilada como controles negativos. 12.Los síntomas se registraron durante 8 días.
2. Aislamiento de las cepas, metodología aguacates: 1. Frutos de aguacate variedad Hass en punto de cosecha fueron recolectados en sitio de acopio de la Cooperativa Multiactiva Ecomun Esperanza del Pueblo (COOMEEP), en el municipio de Silvia (Cauca). 2. Un kilo del material vegetal fue dispuesto en bolsas de polietileno de baja densidad, embalado en caja de cartón y enviado vía aérea para su procesamiento en laboratorio. 3. Los frutos fueron lavados en hipoclorito de sodio al 1% y enjuagados con agua destilada estéril para eliminar contaminantes externos, secando con toallas de papel y dispuestos en cámaras húmedas (25°C, 14 días) para la observación de desarrollo de síntomas característicos propios de antracnosis causados por Colletotrichum sp.. 4. A partir de lesiones hundidas generadas en la epidermis del fruto y con la formación de masas compactas de color salmon-naranja se tomó mediante raspado con asa recta estéril una muestra de esporas que fue sembrada en cajas Petri conteniendo PDA (25°C; 7 días) hasta obtener crecimiento del patógeno. 5. Resiembras sucesivas en PDA se realizaron para purificar el fitopatógeno siendo codificado como CC001.
3. Caracterización morfológica y molecular: Se registraron características macroscópicas (color, apariencia de la colonia, hábito de crecimiento, pigmentos y diámetro) y microscópicas (color de las hifas, presencia de septos, grosor de la pared, descripción de los conidios y presencia de conidioma botrítico) de los aislados.
4. Secuenciación las cepas en CORPOGEN, siguiendo el protocolo: 1. Aislamiento y purifiación del ADN. 2. Amplificación por PCR de los iniciadores ITS (ITS5 – ITS4). 3. Purificación de los fragmentos de PCR y secuenciación mediante Sanger. 4. Limpieza y ensamblaje de las secuencias. 5. Análisis taxonómico de la secuencia mediante la herramienta BLAST (Basic Local Alignment Search Tool), del NCBI (National Center for Biotechnology Information). 6. Análisis taxonómico de la secuencia mediante la herramienta BLAST comparando contra la base de datos de UNITE. 7. Análisis taxonómico de la secuencia mediante la herramienta “MycoID”, utilizando el software BioloMICS. 8. Clasificación taxonómica de la secuencia consenso. Este recurso contiene 1 registro de Botrytis cinerea (aislado del material vegetal de rosa) y 1 registro de complejo Colletotrichum acutatum (aislado del fruto de aguacate).

En el presente recurso 2 muestras colectadas fueron identificadas como Botrytis cinerea correspondiente a la familia Sclerotiniaceae como causante de moho gris en rosas en Cundinamarca, Colombia y 1 muestra fue identificada como Colletotrichum de la familia Glomerellaceae.

1. Botrytis cinerea
   common name: Moho gris rank: species
2. Colletotrichum
   common name: Antracnosis rank: genus

Dentro del proyecto 85723 - BIOFLORHASS: Programa de innovación y cooperación tecnológica para el desarrollo de estrategias de control biológico para los cultivos de rosas y aguacate Hass en Colombia. Se realizó un muestreo para colecta de frutos de aguacates de muestras comerciales en las localidades de San Vicente de Ferrer en Antioquia y Silvia en Cauca. Por otro lado, en cuanto al material vegetal de rosas las muestras comerciales fueron recolectadas en Cogua y Sopó en Cundinamarca.