Colección de bacterias aisladas de Musa sp.

Study Extent

Sampling

Method steps

1. Las Muestras de hojas de banano se obtuvieron del campo experimental AUGURA. En cada plantación se seleccionaron 5 puntos para recolectar muestras compuestas de tres plantas antes de la floración mediante un muestreo probabilístico sin reposición. Se tomaron muestras de la posición de las hojas 2, 5 y 10 de cada planta, y cada hoja se dividió en cuatro partes iguales. Luego, se seleccionó para el análisis una parte del ápice y otra de la base.
2. El aislamiento de bacterias epífitas se realizó con modificaciones a la metodología propuesta por un Yadav et al. 2005, lavando las muestras en un tampón de fosfato de sodio estéril. Las muestras se diluyeron en serie y 100 μL de cada dilución se sembraron en Agar Tripticase Soya (TSA). La población total de bacterias epífitas se estimó después de 48 h de incubación a 30 °C para aquellas diluciones que contenían 50–100 CFU por placa. Para el conteo total de bacterias epífitas y endófitas, las muestras sonicadas se homogeneizaron en una licuadora durante 10 s y, posteriormente, se realizó el mismo procedimiento de diluciones seriadas y placas. El conteo de bacterias cultivables en la filosfera se realizó para muestras de diferentes zonas foliares, posición de las hojas y plantas de diferentes cultivares de banano y plátano de Urabá (Colombia) con el fin de identificar la influencia de estas fuentes en la variabilidad (zona foliar, posición y cultivar) del tamaño de la población de bacterias epífitas y endófitas.
3. Para seleccionar bacterias formadoras de endosporas (AEFB), se determinó la clasificación de Gram de cada colonia de acuerdo con el protocolo de Buck. Las bacterias grampositivas se purificaron en TSA al 10 % y se cultivaron en medios de Finley y Field. Los caldos de cultivo resultantes se sometieron a choque térmico y se sembraron en TSA para seleccionar bacterias. Todos los AEFB se almacenaron a -80 °C en Tripticase Soya Broth (TSB) con glicerol.
4. Las muestras de raíces se recolectaron de las raíces de tres Musa spp. cultivares (plátano cv. Grand Naine y banano cv. Valery que pertenece al grupo de genoma AAA y subgrupo Cavendish, y plátano cv. Harton que pertenece al grupo de genoma AAB) en Urabá, Colombia (región nororiental). Para plátano cv. Grand Naine, se obtuvieron muestras de raíces de las plantaciones 1, 2 y 3; para cv. Valery, de las plantaciones 1 y 4; y para plátano cv. Harton, de las plantaciones 1 y 5. En cada plantación, se recolectaron muestras compuestas de raíces de tres plantas adyacentes (en etapa de prefloración) a 5–10 cm de profundidad se almacenaron en bolsas de propileno a 4 ◦C y se procesaron en 24 h.
5. El aislamiento de AEFB se llevó a cabo suspendiendo 40 g de raíces con suelo de rizosfera adherido en 400 ml de tampón de fosfato de sodio, sonicando la suspensión durante 10 min. en un limpiador de ultrasonidos. A continuación, las suspensiones se colocaron en un agitador orbital durante 1 h y se homogeneizaron en una licuadora durante 15 s. Las suspensiones se diluyeron en serie y se sometieron a un tratamiento térmico y luego, 100 l de cada dilución se sembraron en TSA. Se seleccionaron, purificaron y almacenaron diferentes morfotipos a -80 ◦C en TSB con glicerol.

1. Bacillaceae
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2. Paenibacillaceae
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