Análisis de determinación de aminoácidos, compuestos fenólicos y azúcares realizados a 21 especies de plantas útiles de los mercados de Barranquilla

Study Extent

Distrito de mercados de la ciudad de Barranquilla (Atlántico, Colombia).

Sampling

Se colectaron diferentes estructuras de las especies que eran de interés. Éstas podrían ser hojas, frutos, tallos o cortezas, dependiendo de los análisis que se les fuera a realizar y el objetivo planteado para cada una. Se aseguró que estuvieran las cantidades mínimas requeridas que en este caso correspondía a 100 g de material fresco o 10 g de material seco por análisis; es decir que, si a una misma estructura se le hacían 2 análisis diferentes, la cantidad correspondía a 200 g de material fresco o 20 g de material seco. Cabe mencionar que los pesos no fueron exactos y más bien se buscó sobrepasar el mínimo requerido porque en los mercados de Barranquilla no se contaba con las condiciones para asegurar la exactitud en las cantidades que debían ser enviadas a los laboratorios. De cada una de las especies, se envió una muestra con las condiciones antes especificadas y se empacaron en bolsas Ziploc marcadas. Adicionalmente, las hojas y cortezas se empacaron previamente en bolsas de papel. Posteriormente, los materiales más perecederos fueron introducidos en cavas de icopor que contenían geles para refrigerar y asegurar la cadena de frío hasta el sitio de análisis. Las demás especies que no requerían este procedimiento fueron empacadas en cajas de cartón.

Quality Control

Como control de calidad se empleó la verificación del nivel mínimo de cuantificación para cada método.

Method steps

1. Análisis de polifenóles La preparación de la muestra se realizó por medio de un procedimiento interno del laboratorio. Como estándares de referencia se utilizaron las xantinas: cafeína (Part N° C8960-250G, Sigma-Aldrich), teobromina (Part N° T4500-25G, Sigma-Aldrich) y teofilina (Part N° T1633-25G, Sigma-Aldrich); las catequinas: (±)-catequina (C) (Part N° C1788-500MG, Sigma-Aldrich), (-)-epigalocateqina galato (EGCG) (Part N° E4143-50MG, Sigma-Aldrich), (-)-epicateqina (EC) (Part N° E1753-1G, Sigma-Aldrich), (-)-epicateqina galato (ECG) (Part N° E3893-10MG, Sigma-Aldrich), (-)-epigalocateqina (EGC) (Part N° E3768-5MG, Sigma-Aldrich); los flavonoides: ácido caféico (Part N° C0625, Sigma-Aldrich), ácido p-cumárico (Part N° C9008, Sigma-Aldrich), ácido rosmarínico (Part N° 536954-5G, Sigma-Aldrich), quercetina (Part N° Q4951-10G, Sigma-Aldrich), naringenina (Part N° N5893-1G, Sigma-Aldrich), luteolina (Part N° L9283-10MG, Sigma-Aldrich), kaempferol (Part N° K0133-50MG, Sigma-Aldrich), pinocembrina (Part N° P5239, Sigma-Aldrich), apigenina (Part N° A3145-25MG, Sigma-Aldrich); las antocianinas: cianidina 3-rutinosido (Part N° G36428, Sigma-Aldrich), pelargonidina 3-glucósido (Part N° 53489, Sigma-Aldrich), quercetina 3-glucósido (Part N° 89230, Phytolab).
   Los análisis se realizaron en un cromatógrafo líquido de ultra-alta eficiencia (UHPLC), Dionex Ultimate 3000 (Thermo Scientific, Sunnyvale, CA, EE.UU.), equipado con una bomba binaria de gradiente (HP G3400RS), un inyector automático de muestras (WPS 300TRS) y una unidad termostada para la columna (TCC 3000). La interfaz del LC-MS fue la electronebulización (ESI) y el espectrómetro de masas fue de alta resolución con un sistema de detección de corrientes de iones Obitrap. Operado en modo positivo con un voltaje de capilar de 4,5 kV. Con una columna Hypersil GOLD Aq (Thermo Scientific, Sunnyvale, CA, EE.UU.; 100 x 2.1 mm, 1.9 µm de tamaño de partícula) a 30 °C. La fase móvil fue A: una solución acuosa de 0,2% de formiato de amonio y B: acetonitrilo con 0,2% de formiato de amonio. La condición inicial de gradiente fue de 100% A, cambiando linealmente hasta 100% B (8 min); se mantuvo durante 4 min; el retornó a las condiciones iniciales en 1 min; el tiempo total de corrida fue de 13 min, con 3 min para post-corrida. La identificación de los compuestos se realizó usando el modo de adquisición full scan y la extracción de corrientes iónicas (EIC) correspondientes a los [M+H]+ de compuestos de interés, medición de masas con exactitud y precisión de Δppm < 1 y usando una solución-mix estándar de los compuestos (sustancias certificadas estándar), para la cuantificación de los analitos de interés se realizaron curvas de calibración empleando los materiales de referencia certificados.
2. Análisis de azúcares El análisis de las muestras se desarrolló según el artículo “Comparison of MTBSTFA and BSTFA in derivatization reactions of polar compounds prior to GC/MS analysis. Talanta, Volume 77, Issue 4, 15 February 2009, Pages 1473-1482. Se emplearon como estándares de referencia de: fructosa (Dr. Ehrenstorfer, 99.5%), galactosa (Dr. Ehrenstorfer, 99.5%), glucosa (Dr. Ehrenstorfer, 99.5%), maltosa (Dr. Ehrenstorfer, 99.0%), manitol (Dr. Ehrenstorfer, 99.0%), sacarosa (Dr. Ehrenstorfer, 99.5%), sorbitol (Dr. Ehrenstorfer, 98.6%) y xilitol (Dr. Ehrenstorfer, 99.8%). El análisis de la(s) muestra(s) se realizó en cromatógrafo de gases (GC) AT 6890N (Agilent Technologies, Palo Alto, California, EE.UU.), con detector de ionización de llama (FID). La columna empleada en el análisis fue HP-Ultra 2 (J & W Scientific, Folsom, CA, EE.UU.) de 5%-Ph-PDMS, 25 m x 0,20 mm x 0,33 µm.
3. Análisis de aminoácidos La preparación de la muestra se llevó a cabo empleado un procedimiento interno del laboratorio. Como estándares de referencia se utilizaron: asparagina (AccuStandard, 99%), ácido glutámico (AccuStandard, 99%), ácido aspártico (AccuStandard, 98% ) y glutamina (AccuStandard, 98%). Los análisis se realizaron en un cromatógrafo líquido de ultra-alta eficiencia (UHPLC), Dionex Ultimate 3000 (Thermo Scientific, Sunnyvale, CA, EE.UU.), equipado con una bomba binaria de gradiente (HP G3400RS), un inyector automático de muestras (WPS 300TRS) y una unidad termostada para la columna (TCC 3000). La interfaz del LC-MS fue la electronebulización (ESI) y el espectrómetro de masas fue de alta resolución con un sistema de detección de corrientes de iones Obitrap. Operado en modo positivo con un voltaje de capilar de 4,5 kV. Se empleó un columna Hypersil GOLD Aq (Thermo Scientific, Sunnyvale, CA, EE.UU.; 100 x 2.1 mm, 1.9 µm de tamaño de partícula) a 30 °C. La fase móvil fue A: una solución acuosa de 0,2% de formiato de amonio y B: acetonitrilo con 0,2% de formiato de amonio. La condición inicial de gradiente fue de 100% A, cambiando linealmente hasta 100% B (8 min); se mantuvo durante 4 min; el retornó a las condiciones iniciales en 1 min; el tiempo total de corrida fue de 13 min, con 3 min para post-corrida. La identificación de los compuestos se realizó usando el modo de adquisición full scan y la extracción de corrientes iónicas (EIC) correspondientes a los [M+H]+ de compuestos de interés, medición de masas con exactitud y precisión de Δppm < 1 y usando una solución-mix estándar de los compuestos (sustancias certificadas estándar), para la cuantificación de los analitos de interés se realizaron curvas de calibración empleando los materiales de referencia certificados.

Análisis fisicoquímicos de 21 especies de plantas útiles de los mercados públicos del centro de la ciudad de Barranquilla.

1. Bactris guineensis
   common name: Corozo rank: species
2. Manilkara zapota
   common name: Níspero rank: species
3. Cassia grandis
   common name: Cañandonga rank: species
4. Hymenaea courbaril
   common name: Algarrobo rank: species
5. Smilax
   common name: Zarzaparrilla rank: genus
6. Ipomoea batatas
   common name: Batata rank: species
7. Eryngium foetidum
   common name: Culantro rank: species
8. Guazuma ulmifolia
   common name: Guásimo rank: species
9. Aristolochia
   common name: Contragavilana rank: genus
10. Maytenus laevis
    common name: Chuchuguaza rank: species
11. Equisetum
    common name: Cola de caballo rank: genus
12. Schnella glabra
    common name: Bejuco cadeneta | Pata de vaca rank: species
13. Bursera graveolens
    common name: Caraña rank: species
14. Libidibia coriaria
    common name: Divi divi rank: species
15. Dysphania ambrosioides
    common name: Paico rank: species
16. Petiveria alliacea
    common name: Anamú rank: species
17. Gliricidia sepium
    common name: Matarratón rank: species
18. Cecropia peltata
    common name: Guarumo rank: species
19. Jatropha gossypiifolia
    common name: Tua tua rank: species
20. Aphelandra
    common name: Sangregorio rank: genus
21. Croton malambo
    common name: Malambo rank: species

Toma de muestras de especies de plantas útiles en la ciudad de Barranquilla (Atlántico, Colombia).